Что означает анализ пцр гепатита

Что означает анализ пцр гепатита

ПЦР анализ

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Что такое метод полимеразной цепной реакции?

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Читайте также:  Узи печени какие нормы

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Разновидности исследования ПЦР

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

  1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
  2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
  3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Показания к проведению

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

  • Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
  • Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
  • Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
  • Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
  • Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
  • При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
  • Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
  • Для контроля результативности проводимой терапии.
  • После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Подготовка к проведению исследования и забор материала

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

  1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
  2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
  3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
  4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

  • Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
  • Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
  • В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
  • После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
  • К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

Преимущества ПЦР перед другими анализами

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Прямая диагностика возбудителя патологии Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента.
Специфичность исследования ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки.
Высокая степень чувствительности Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови.
Определение всех возбудителей Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов.
Скрыто протекающие инфекции Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью.

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровка результатов

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественный

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Читайте также:  Лечение грибка на лице

Количественный

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат Расшифровка
Отрицательно Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест.
До 8*10^5 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно.
От 8*10^5 МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений.
2,4*10^7 МЕ/мл РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости.

Генотипирование

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Когда ПЦР отрицательно, а ИФА положительно

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Стоимость исследования на гепатит С

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Название лабораторной службы Ценовая политика
Хеликс · Стоимость забора биологического материала – 170 рублей.

· Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей.

· Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня).

· Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей.

Инвитро · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей.

· Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей.

· Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей.

· Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей.

· Проведение генотипирования – от 1250 рублей.

Гемотест · Цена количественного исследования 2200 рублей.

· Качественная диагностика от 700 рублей.

· Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей.

· Забор крови из вены около 150 рублей.

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

Что такое анализ ПЦР?

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Виды ПЦР-анализа на гепатит С

Различают три вида ПЦР-анализа:

    Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

Читайте также:  Масло пальмоядровое вред
  • Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.
  • Показания к ПЦР-анализу на гепатит С

    ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

    • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
    • положительный результат иммуноферментного анализа;
    • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
    • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
    • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
    • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
    • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
    • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
    • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

    Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С

    Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

    Расшифровка качественного анализа .

    В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

    Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

    Расшифровка количественного анализа .

    Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

    Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

    Больше 8*10^5 МЕ/мл

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

    Больше 2,4*10^7 МЕ/мл

    Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

    Расшифровка генотипирования .

    Обнаружена РНК определенного генотипа

    В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

    Обнаружена РНК вируса гепатита С

    В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

    Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

    Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

    Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

    • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
    • образец биоматериала был загрязнен;
    • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
    • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

    Преимущества ПЦР перед другими методами

      Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

    Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

  • Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.
  • Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

    Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

    Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

    • анализ крови сдают с утра;
    • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
    • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
    • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.
    Ссылка на основную публикацию

    Что означает анализ пцр гепатита

    ПЦР анализ

    Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

    Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

    Стоимость пцр

    ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

    Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

    Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

    Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

    Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

    На что же влияет вирусная нагрузка?

    Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

    Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

    Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

    Как часто нужно делать количественный тест?

    Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

    Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

    Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

    Рис.2 Пример результатов количественного теста.

    Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

    Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

    Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

    Что такое метод полимеразной цепной реакции?

    Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

    Читайте также:  Строение почечного фильтра

    Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

    Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

    Разновидности исследования ПЦР

    Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

    1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
    2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
    3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

    Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

    Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

    Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

    Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

    Показания к проведению

    Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

    • Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
    • Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
    • Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
    • Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
    • Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
    • При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
    • Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
    • Для контроля результативности проводимой терапии.
    • После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

    ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

    Подготовка к проведению исследования и забор материала

    Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

    1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
    2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
    3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
    4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

    За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

    Забор крови происходит следующем образом:

    • Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
    • Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
    • В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
    • После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
    • К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

    Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

    Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

    Преимущества ПЦР перед другими анализами

    У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

    Плюсы исследования представлены в таблице:

    Прямая диагностика возбудителя патологии Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента.
    Специфичность исследования ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки.
    Высокая степень чувствительности Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови.
    Определение всех возбудителей Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов.
    Скрыто протекающие инфекции Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью.

    Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

    Расшифровка результатов

    Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

    Качественный

    Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

    В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

    Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

    Читайте также:  Лечение грибка на лице

    Количественный

    Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

    Результат Расшифровка
    Отрицательно Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости.
    До 1,8*10^2 МЕ/мл Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест.
    До 8*10^5 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно.
    От 8*10^5 МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений.
    2,4*10^7 МЕ/мл РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости.

    Генотипирование

    Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

    Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

    Когда ПЦР отрицательно, а ИФА положительно

    Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

    Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

    ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

    Стоимость исследования на гепатит С

    Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

    В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

    Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

    Название лабораторной службы Ценовая политика
    Хеликс · Стоимость забора биологического материала – 170 рублей.

    · Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей.

    · Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня).

    · Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей.

    Инвитро · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей.

    · Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей.

    · Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей.

    · Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей.

    · Проведение генотипирования – от 1250 рублей.

    Гемотест · Цена количественного исследования 2200 рублей.

    · Качественная диагностика от 700 рублей.

    · Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей.

    · Забор крови из вены около 150 рублей.

    Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

    Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

    По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

    Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

    Что такое анализ ПЦР?

    ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

    Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

    Виды ПЦР-анализа на гепатит С

    Различают три вида ПЦР-анализа:

      Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

    Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

    Читайте также:  Опущение матки фото начальная
  • Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.
  • Показания к ПЦР-анализу на гепатит С

    ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

    • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
    • положительный результат иммуноферментного анализа;
    • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
    • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
    • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
    • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
    • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
    • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
    • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

    Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С

    Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

    Расшифровка качественного анализа .

    В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

    Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

    Расшифровка количественного анализа .

    Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

    Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

    Больше 8*10^5 МЕ/мл

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

    Больше 2,4*10^7 МЕ/мл

    Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

    Расшифровка генотипирования .

    Обнаружена РНК определенного генотипа

    В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

    Обнаружена РНК вируса гепатита С

    В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

    Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

    Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

    Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

    • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
    • образец биоматериала был загрязнен;
    • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
    • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

    Преимущества ПЦР перед другими методами

      Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

    Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

  • Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.
  • Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

    Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

    Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

    • анализ крови сдают с утра;
    • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
    • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
    • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.
    Ссылка на основную публикацию
    Adblock detector